紫外光度計測總黃酮的原理

xiaobaba

紫外光度計（紫外分光光度計）測總黃酮的原理基于黃酮類化合物在紫外光區的特征吸收特性，結合比爾定律（Beer-Lambert Law）實現定量分析。具體原理及步驟如下：

一、核心原理
1.特征吸收峰
黃酮類化合物的分子結構中含有共軛雙鍵和酚羥基，使其在紫外光區（通常為250-350 nm）具有特征吸收峰。例如：
①蘆丁（常見對照品）在510 nm處有強吸收；
②大豆異黃酮在259 nm處有最大吸收；
③蜂膠中的黃酮類化合物在415 nm附近有吸收。
2.顯色反應（可選）
為提高靈敏度和選擇性，可通過顯色反應增強吸收信號。例如：
①亞硝酸鈉-硝酸鋁法：黃酮類化合物的3,5-二羥基與Al3?形成絡合物，在堿性條件下（NaOH）生成橙紅色產物，最大吸收波長紅移至510 nm。
②三氯化鋁法：適用于含3-羥基或5-羥基的黃酮，顯色后在420 nm處測定。
3.比爾定律
吸光度（A）與溶液中黃酮類化合物的濃度（c）成正比，公式為：A=ε?b?c
其中：
ε 為摩爾吸光系數（常數）；
b 為光程（比色皿厚度，通常為1 cm）；
c 為溶液濃度（mg/mL）。

二、操作步驟
1.樣品提取與純化
①固體樣品（如中藥、保健食品）：用甲醇、乙醇或石油醚提取黃酮類成分，去除脂溶性雜質。
②液體樣品：直接稀釋或用60%乙醇溶解。
2.顯色反應（如需）
加入顯色劑（如5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁、氫氧化鈉），反應后生成有色絡合物。
3.測定吸光度
使用紫外光度計在最大吸收波長（如510 nm、415 nm或259 nm）處測定樣品溶液的吸光度。
4.標準曲線法定量
①配制系列濃度的對照品溶液（如蘆丁），測定吸光度并繪制標準曲線（吸光度 vs 濃度）。
②根據樣品吸光度，從標準曲線上查得總黃酮濃度，計算含量：X=C?V1?V3×100/V2?M×1000
其中：
X：總黃酮含量（g/100g或g/100mL）；
C：標準曲線上查得的濃度（mg/mL）；
V1：試樣定容體積（mL）；
V2：吸取供試品溶液體積（mL）；
V3：對照品溶液定容體積（mL）；
M：試樣取樣量（g或mL）。

三、關鍵點
1.波長選擇
根據黃酮類型和顯色反應選擇最大吸收波長，避免干擾峰。例如：
①蘆丁顯色后選510 nm；
②大豆異黃酮直接測259 nm。
2.顯色條件優化
①反應時間（如亞硝酸鈉反應6分鐘，硝酸鋁反應6分鐘，總反應時間15分鐘）；
②試劑用量（如5%亞硝酸鈉1 mL、10%硝酸鋁1 mL、氫氧化鈉10 mL）。
3.線性范圍與檢出限：蘆丁標準曲線線性范圍通常為0-20 μg/mL，檢出限可達0.162 μg/mL。

四、應用實例
1.蜂膠總黃酮測定：
以蘆丁為對照品，顯色后于415 nm處測定，線性回歸方程 R2=0.9999，回收率102.4%。
2.大豆異黃酮測定：直接用95%乙醇溶解，259 nm處測定，無需顯色反應。

sw837

這個趨勢分析很有價值。

蛋撻吃不吃

樓主說得太有道理了，這些設備維護的關鍵點太重要了～