紫外光度計(jì)測總黃酮的原理

xiaobaba

紫外光度計(jì)（紫外分光光度計(jì)）測總黃酮的原理基于黃酮類化合物在紫外光區(qū)的特征吸收特性，結(jié)合比爾定律（Beer-Lambert Law）實(shí)現(xiàn)定量分析。具體原理及步驟如下：

一、核心原理
1.特征吸收峰
黃酮類化合物的分子結(jié)構(gòu)中含有共軛雙鍵和酚羥基，使其在紫外光區(qū)（通常為250-350 nm）具有特征吸收峰。例如：
①蘆丁（常見對照品）在510 nm處有強(qiáng)吸收；
②大豆異黃酮在259 nm處有最大吸收；
③蜂膠中的黃酮類化合物在415 nm附近有吸收。
2.顯色反應(yīng)（可選）
為提高靈敏度和選擇性，可通過顯色反應(yīng)增強(qiáng)吸收信號。例如：
①亞硝酸鈉-硝酸鋁法：黃酮類化合物的3,5-二羥基與Al3?形成絡(luò)合物，在堿性條件下（NaOH）生成橙紅色產(chǎn)物，最大吸收波長紅移至510 nm。
②三氯化鋁法：適用于含3-羥基或5-羥基的黃酮，顯色后在420 nm處測定。
3.比爾定律
吸光度（A）與溶液中黃酮類化合物的濃度（c）成正比，公式為：A=ε?b?c
其中：
ε 為摩爾吸光系數(shù)（常數(shù)）；
b 為光程（比色皿厚度，通常為1 cm）；
c 為溶液濃度（mg/mL）。

二、操作步驟
1.樣品提取與純化
①固體樣品（如中藥、保健食品）：用甲醇、乙醇或石油醚提取黃酮類成分，去除脂溶性雜質(zhì)。
②液體樣品：直接稀釋或用60%乙醇溶解。
2.顯色反應(yīng)（如需）
加入顯色劑（如5%亞硝酸鈉、10%硝酸鋁、氫氧化鈉），反應(yīng)后生成有色絡(luò)合物。
3.測定吸光度
使用紫外光度計(jì)在最大吸收波長（如510 nm、415 nm或259 nm）處測定樣品溶液的吸光度。
4.標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量
①配制系列濃度的對照品溶液（如蘆丁），測定吸光度并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（吸光度 vs 濃度）。
②根據(jù)樣品吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得總黃酮濃度，計(jì)算含量：X=C?V1?V3×100/V2?M×1000
其中：
X：總黃酮含量（g/100g或g/100mL）；
C：標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的濃度（mg/mL）；
V1：試樣定容體積（mL）；
V2：吸取供試品溶液體積（mL）；
V3：對照品溶液定容體積（mL）；
M：試樣取樣量（g或mL）。

三、關(guān)鍵點(diǎn)
1.波長選擇
根據(jù)黃酮類型和顯色反應(yīng)選擇最大吸收波長，避免干擾峰。例如：
①蘆丁顯色后選510 nm；
②大豆異黃酮直接測259 nm。
2.顯色條件優(yōu)化
①反應(yīng)時(shí)間（如亞硝酸鈉反應(yīng)6分鐘，硝酸鋁反應(yīng)6分鐘，總反應(yīng)時(shí)間15分鐘）；
②試劑用量（如5%亞硝酸鈉1 mL、10%硝酸鋁1 mL、氫氧化鈉10 mL）。
3.線性范圍與檢出限：蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線線性范圍通常為0-20 μg/mL，檢出限可達(dá)0.162 μg/mL。

四、應(yīng)用實(shí)例
1.蜂膠總黃酮測定：
以蘆丁為對照品，顯色后于415 nm處測定，線性回歸方程 R2=0.9999，回收率102.4%。
2.大豆異黃酮測定：直接用95%乙醇溶解，259 nm處測定，無需顯色反應(yīng)。

sw837

這個(gè)趨勢分析很有價(jià)值。

蛋撻吃不吃

樓主說得太有道理了，這些設(shè)備維護(hù)的關(guān)鍵點(diǎn)太重要了～