共聚焦顯微鏡和熒光顯微鏡的區(qū)別

森鴻科技

共聚焦顯微鏡和熒光顯微鏡在原理、特點(diǎn)和應(yīng)用上存在顯著的區(qū)別。以下是對(duì)這兩者的詳細(xì)比較：
一、原理
1.熒光顯微鏡：以紫外線為光源，用以照射被檢物體，使之發(fā)出熒光，然后在顯微鏡下觀察物體的形狀及其所在位置。細(xì)胞中有些物質(zhì)，如葉綠素等，受紫外線照射后可發(fā)熒光；另有一些物質(zhì)本身雖不能發(fā)熒光，但如果用熒光染料或熒光抗體染色后，經(jīng)紫外線照射亦可發(fā)熒光。
2.共聚焦顯微鏡：也稱為激光共聚焦顯微鏡，它在熒光顯微鏡成像的基礎(chǔ)上加裝激光掃描裝置，使用紫外光或可見(jiàn)光激發(fā)熒光探針。其工作原理是利用激光束作為光源，激光束經(jīng)照明針孔，經(jīng)由分光鏡反射至物鏡，并聚焦于樣品上，對(duì)標(biāo)本焦平面上每一點(diǎn)進(jìn)行掃描。組織樣品中如果有可被激發(fā)的熒光物質(zhì)，受到激發(fā)后發(fā)出的熒光經(jīng)原來(lái)入射光路直接反向回到分光鏡，通過(guò)探測(cè)針孔時(shí)先聚焦，聚焦后的光被光電倍增管（PMT）探測(cè)收集，并將信號(hào)輸送到計(jì)算機(jī)，處理后在計(jì)算機(jī)顯示器上顯示圖像。
二、特點(diǎn)
1.熒光顯微鏡：主要用于研究細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的吸收、運(yùn)輸、化學(xué)物質(zhì)的分布及定位等。熒光顯微鏡可以對(duì)活體細(xì)胞進(jìn)行三維成像和追蹤，是免疫熒光細(xì)胞化學(xué)的基本工具。
2.共聚焦顯微鏡：能夠利用計(jì)算機(jī)進(jìn)行圖像處理，從而得到細(xì)胞或組織內(nèi)部微細(xì)結(jié)構(gòu)的熒光圖像，以及在亞細(xì)胞水平上觀察諸如Ca2?、pH值、膜電位等生理信號(hào)及細(xì)胞形態(tài)的變化。共聚焦顯微鏡脫離了傳統(tǒng)光學(xué)顯微鏡的場(chǎng)光源和局部平面成像模式，具有多重染色、高Z軸分解能、高畫質(zhì)等特點(diǎn)。
三、應(yīng)用
1.熒光顯微鏡：
生物大分子的研究：熒光標(biāo)記可以對(duì)分子發(fā)生的變化進(jìn)行實(shí)時(shí)追蹤和記錄，因此熒光顯微鏡成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、細(xì)胞膜、DNA和RNA結(jié)構(gòu)的研究。
細(xì)胞生物學(xué)：熒光顯微鏡成像技術(shù)可以對(duì)細(xì)胞器、細(xì)胞膜、基因表達(dá)、細(xì)胞周期等細(xì)胞內(nèi)分子級(jí)別的生理過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)成像，揭示細(xì)胞基本生理過(guò)程的發(fā)生、發(fā)展和終結(jié)過(guò)程。
神經(jīng)科學(xué)：熒光顯微鏡成像技術(shù)可以實(shí)時(shí)地觀測(cè)神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)纖維和神經(jīng)突觸等微觀結(jié)構(gòu)的變化。
醫(yī)學(xué)診斷：熒光顯微鏡可以對(duì)組織切片進(jìn)行高效成像，以幫助醫(yī)學(xué)科學(xué)家對(duì)疾病進(jìn)行更精細(xì)的研究和診斷。此外，還可以將熒光染料標(biāo)記到待檢測(cè)的生物標(biāo)志物上，如病毒、細(xì)胞、蛋白質(zhì)、腫瘤等，用于多種疾病的檢測(cè)和病理診斷。
2.共聚焦顯微鏡：
細(xì)胞形態(tài)定位、立體結(jié)構(gòu)重組、動(dòng)態(tài)變化過(guò)程等研究。
提供定量熒光測(cè)定、定量圖像分析等實(shí)用研究手段。
結(jié)合其他相關(guān)生物技術(shù)，在形態(tài)學(xué)、生理學(xué)、免疫學(xué)、遺傳學(xué)等分子細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。
綜上所述，共聚焦顯微鏡和熒光顯微鏡在原理、特點(diǎn)和應(yīng)用上各有優(yōu)勢(shì)，具體選擇哪種顯微鏡取決于研究目的和樣品特性。