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分光光度計是實驗室中用于定量分析物質濃度的核心儀器，通過測量物質對特定波長光的吸收程度（吸光度），結合朗伯-比爾定律（A=ε?c?l），可間接計算目標物質的濃度。以下是其使用流程、關鍵步驟及注意事項的詳細說明：
一、使用前準備- 儀器檢查
- 開機預熱：開啟電源后，儀器需預熱15-30分鐘（紫外可見分光光度計需預熱更久），確保光源穩定。
- 光源檢查：確認鎢燈（可見光區）或氘燈（紫外光區）正常點亮，無閃爍或異常噪音。
- 波長校準：使用鈥玻璃、汞燈等標準物質驗證波長準確性（如546.07 nm、486.13 nm等特征峰）。
- 試劑與樣品準備
- 空白對照：使用與樣品相同的溶劑（如去離子水、緩沖液）作為參比溶液，消除溶劑背景吸收。
- 樣品處理：確保樣品澄清透明，避免懸浮顆粒干擾（如需離心或過濾）。
- 濃度范圍：根據預估濃度稀釋樣品，使吸光度落在0.2-0.8（線性范圍）之間。
二、操作步驟- 波長設置
- 根據目標物質的吸收峰選擇波長（如核酸在260 nm，蛋白質在280 nm）。
- 示例：測定DNA濃度時，設置波長為260 nm。
- 調零（基線校正）
- 將空白對照溶液倒入比色皿（光程通常為1 cm），放入樣品室。
- 調節“調零”或“Abs 0”旋鈕，使儀器顯示吸光度為0.000。
- 樣品測量
- 倒出空白溶液，用待測樣品潤洗比色皿2-3次，再注入樣品。
- 擦拭比色皿外壁水漬，放入樣品室，關閉艙門。
- 讀取吸光度值（A）或透光率（T，T=10?A）。
- 數據處理
- 單波長法：直接使用吸光度值計算濃度（c=A/(ε?l)）。
- 雙波長法：選擇兩個波長（如260 nm和280 nm），通過差值消除雜質干擾。
- 標準曲線法：測定一系列已知濃度標準品的吸光度，繪制線性回歸方程，再計算未知樣品濃度。
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發表于 2025-5-28 08:58:31
