流式細胞儀的電壓和增益參數優化

慧儀儀器

優化流式細胞儀的電壓和增益參數是確保信號檢測準確性和實驗可重復性的關鍵步驟。以下是詳細的操作指南：  
?一、理解電壓和增益的作用  
?電壓：調節光電倍增管的靈敏度，影響信號放大倍數。電壓過高會導致信號飽和（過曝），過低則無法檢測弱信號。  
?增益：部分儀器通過增益調整信號放大倍數，與電壓配合使用，確保信號在檢測器的線性動態范圍內。  
?二、優化參數的準備工作  
?樣本準備  
?陰性對照：未染色的細胞或同型對照，用于確定背景信號。  
?陽性對照：明確表達目標抗原的細胞，用于驗證信號強度。  
?校準微球：如熒光微球，用于標準化儀器性能。  
?儀器預熱  
開機后預熱30分鐘，確保激光器和液流系統穩定。  
?三、分步優化電壓和增益  
?步驟1：初始參數設定  
使用儀器默認電壓或歷史實驗的合理參數作為起點。  
若首次使用，參考儀器手冊或校準微球說明書推薦值。  
?步驟2：調整前向散射（FSC）和側向散射（SSC）?  
運行陰性對照樣本，觀察FSC和SSC的分布。  
調節FSC和SSC的電壓，使細胞群集中在散點圖中央（避免信號超出坐標軸）。  
?目標：細胞群清晰可見，碎片和噪音信號被閾值過濾。  
?步驟3：優化熒光通道電壓  
?單色樣本法：  
分別運行單個熒光標記的陽性樣本。  
調節對應通道的電壓，使陽性信號峰值位于對數坐標的中間偏右（如103~10?區間）。  
陰性對照信號應集中在左側（接近10?）。  
?電壓滴定法?（推薦）?：  
使用同一陽性樣本，逐步增加電壓（如每次增加50V），記錄信號分布。  
選擇使陽性與陰性信號分離最佳且無飽和的**電壓。  
?步驟4：驗證多色實驗的兼容性  
運行多色混合樣本，檢查熒光滲漏（補償問題）。  
若補償后仍有干擾，可能需要微調電壓或更換光譜重疊較少的染料組合。  
?步驟5：使用校準微球標準化  
運行校準微球（如8峰微球），確保各熒光通道的電壓使微球信號峰均勻分布。  
記錄標準化參數，便于后續實驗重復。

九華閥門

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鐵馭

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